非洲绿猴肾细胞（Vero）

非洲绿猴肾细胞(Vero)
细胞介绍
Vero细【xì】胞【bāo】株是日本千叶大学【xué】的Y. Yasumura和Y. Kawakita从正常【cháng】成【chéng】年非洲绿【lǜ】猴的肾脏建株的。1964年6月15日B. Simizu将其从千【qiān】叶大学带【dài】到国立健【jiàn】康【kāng】研究【jiū】所(NIH)国立过敏及传染病研【yán】究所热【rè】带病毒实验【yàn】室时，己传至第【dì】93代。
 
细胞特性
1)来源：非洲绿猴正常肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用T25瓶【píng】充液发送活细胞【bāo】。收到细胞后，请先在【zài】显微【wēi】镜下检查细胞生长状态，并【bìng】将T25瓶置于培养箱约6h或【huò】过夜【yè】后，再次【cì】检查细胞状态。若状态良好【hǎo】，可【kě】进行细胞后续处【chù】理操作，按照以下【xià】方式进【jìn】行【háng】。若发现【xiàn】可疑【yí】污染物，请及时与我们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。

非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。（DMEM 液体培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后【hòu】将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养过【guò】夜（或将【jiāng】细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换【huàn】液并检
查细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对【duì】于贴壁细胞，传代【dài】可【kě】参【cān】考以下【xià】方法：弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨【shù】消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后【hòu】加【jiā】少【shǎo】量培养基【jī】终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分
钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中或者瓶【píng】中。
 
细胞冻存：
待【dài】细胞【bāo】生【shēng】长状态良好时，可进行细胞【bāo】冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量【liàng】胰【yí】酶【méi】，细胞变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血【xuè】清的培【péi】养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
非洲绿猴肾细胞(Vero)注意事项：
收到细胞【bāo】后【hòu】，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污【wū】染【rǎn】，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触【chù】过【guò】此细【xì】胞的器皿【mǐn】需要灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。